miRNA RT qPCR檢測

　　實驗介紹MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中發現的一類內源性的具有調控功能的非編碼RNA，其大小長約20~25個核苷酸。成熟的miRNAs是由較長的初級轉錄物經過一系列核酸酶的剪切加工而產生的，隨后組裝進RNA誘導的沉默復合體（RNA-induced silencing complex,RISC），通過堿基互補配對的方式識別靶mRNA，并根據互補程度的不同指導沉默復合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。最近的研究表明miRNA參與各種各樣的調節途徑，包括發育、病毒防御、造血過程、器官形成、細胞增殖和凋亡、脂肪代謝等等。它的表達量分析是生物功能研究的基礎，細胞、組織或血液中miRNA表達譜的檢測，可協助研究信號通路相關miRNA及其靶基因miRNA表達定量分析是生物功能研究的基礎。細胞、組織或血液中的miRNA表達譜的檢測，可協助研究信號通路相關miRNA及其靶基因。

 

　　交付結果：實驗報告，樣本返還

 

　　質量保證：客觀、公正、可信數據結果

 

　　交付時間：大約5-10個工作日（根據預實驗、樣本數量情況決定）

 

　　服務項目： miRNA RT qPCR檢測（莖環法）

 

　　miRNA qPCR引物引物設計、合成、含驗證

 

　　1、相對定量：以U6等為內參，檢測樣本中相關miRNA的表達量。

 

　　2、絕對定量：以化學合成的miRNA成熟鏈為標準品，做5個梯度點以上的稀釋后制作定量標準曲線，通過標準曲線對待檢測miRNA進行絕對定量。

 

　　服務流程1、 依據客戶要求用莖環法設計合成引物（含驗證）

 

　　2、 標準品制備:只針對于絕對定量，相對定量多種內參可供選擇（如：U6，mir-16）

 

　　3、 RNA提取及RNA質量分析：采用Invitrogen的TRIzol 進行裂解提取，RNA提取質量有瓊脂糖凝膠電泳及分光光度計雙重質控

 

　　4、 逆轉錄：嚴格按照fermentas的反轉錄試劑盒要求抽取質控合格的RNA，并且采用基因特異性引物進行反轉錄

 

　　5、 預實驗驗證樣品和引物：依據客戶選定內參及基因，對客戶全部樣本內參及個別樣本基因進行驗證，以確保樣本的反轉錄情況及基因的設計

 

　　6、 正式實驗：在以上所有質控合格的情況下，每個樣本每個基因進行四個復孔的重復檢測，確保至少提供三個復孔Ct≤0.5的數據

 

　　7、 實驗報告：提供詳細的實驗報告，包括RNA提取電泳圖、擴增曲線、溶解曲線及數據結果分析

 

　　樣本要求細胞（≥106個）：必須是活細胞，貼壁或懸浮均可

 

　　組織（≥50mg）:盡量新鮮并且切取之后立即置于液氮或-80℃保存

 

　　石蠟切片（≥10張）：厚度10-20μm，石蠟組織塊或固定組織均可

 

　　全血（2ml以上）：抗凝管4℃運輸，短期保存，分離后血清亦可

 

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